فعالية الببتيدات المضادة للميكروبات

 إسم الباحث: الشيماء توفيق حنفي محمود مقلد-  باحث –  بكتريولوجي معمل بحوث الصحة الحيوانية  ببورسعيد

المشاركون:

د ريهام مختار الطرابيلي  أستاذ مساعد    ميكروبيولوجي جامعة قناة السويس

د سارة محمد عباس باحث – بكتريولوجي معمل بورسعيد – معهد صحة الحيوان

الببتيدات المضادة للميكروبات (AMPs) ببتيدات يطلق عليها احيانا ببتيدات المضيف الدفاعية: هي فئة من الببتيدات الصغيرة الموجودة على نطاق واسع في الطبيعة وهي جزء مهم من جهاز المناعة الفطري للكائنات الحية المختلفة. هذه الببتيدات هي مضادات ميكروبات قوية وواسعة النطاق والتي تظهر إمكاناتها كعوامل علاجية جديدة; حيث ثبت أن الببتيدات المضادة للميكروبات تقتل البكتيريا سالبة الجرام وإيجابية الجرام [1]، والفيروسات المغلفة، والفطريات، وحتى الخلايا المتحولة أو السرطانية [2]، أي انها ذات مدى واسع من التأثير. وقد أدى ظهور الكائنات الحية الدقيقة المقاومة للمضادات الحيوية وزيادة المخاوف بشأن استخدام المضادات الحيوية إلى تطوير AMPs، التي لها احتمال تطبيق جيد في الطب والغذاء وتربية الحيوانات والزراعة وتربية الأحياء المائية.

1- التوزيع الطبيعي للAMPs

منذ اكتشاف أول AMP في شرنقة دودة القز الأمريكية، تم العثور على عدد كبير من AMPs على نطاق واسع في مختلف الكائنات الحية، بما في ذلك الكائنات الحية الدقيقة ، والنباتات ، واللافقاريات ، والأسماك ، والبرمائيات  والزواحف  والطيور  والثدييات [3].

أول AMP معزول في البكتيريا هو النيسين، والذي تنتجه السلالة المضيفة وله سمية خلوية لأنواع أخرى من البكتيريا من أجل التنافس على العناصر الغذائية في البيئة. في العقود الأخيرة، تم استخدام النيسين على نطاق واسع كمادة حافظة طبيعية في العديد من الأطعمة بسبب نشاطه المطهر [4].

تعمل AMPs أيضًا على حماية النباتات من غزو الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض في الهواء والتربة. هناك عائلات متعددة من AMPs المشتقة من النباتات، بما في ذلك الثيونين والديفينسينات والسيكلوتيدات.

2- أنواع وخصائص AMPs :

 الببتيدات المضادة للميكروبات هي مجموعة فريدة ومتنوعة من الجزيئات، وهي اما ان تكون:

• ببتيدات مضادة الجراثيم طبيعية: تنتجها الخلية وتسمى أيضا الببتيدات الدفاعية في الخلية المضيفة، لانها تمثل مكونات من المناعة الذاتية في الخلية، وقادرة على التطور في جميع اشكال الحياة، وهي جزيئات فاعلة يمكن استخدامها كمضادات حيوية، وتصنف كعوامل حيوية علاجية، أثبتت فعاليتها ضد البكتيريا والجراثيم سلبية إيحابية الغرام (حتى السلالات التي تمتلك مقاومة ضد المضادات الحيوية التقليدية).
• الببتيدات مضادة الجراثيم صناعية: حيث أنها تصنع بشكل يتم فيه محاكاة بنية المجال الفعال من الببتديات الطبيعية، يتم ذلك الآن على مستوى أبحاث علمية ضخمة في الكيمياء الطبية من خلال علم هندسة الببتيدات وتصنيع البروتينات، ومن خلالها يتم تصميم جزيئات حيوية قادرة على اختراق الخلية المصابة، ووظيفتها ان تقوم بالتدخل في عرقلة أو إبطال الآلية المرضية ضمن الخلية الجرثومية، وذلك عن طريق تحريض أو تثبيط عناصر أو جزيئات تدخل في الالية المرضية ضمن الخلية المريضة.

3-البنية التركيبية لل  AMPs:

الببتيدات المضادة للميكروبات هي بروتينات قصير السلاسل ، والتي تنقسم إلى مجموعات فرعية على أساس تركيب الأحماض الأمينية وبنيتها.[5] تتكون الببتيدات المضادة للميكروبات عمومًا من 12 إلى 50 حمضًا أمينيًا

تشتمل هذه الببتيدات على اثنين أو أكثر من المخلفات ذات الشحنة الموجبة (يتم تأمينها عن طريق الحمضين الامينيين المسؤولين عن ذلك وهما الأرجنين ، واللايزين ، أو عن طريق وجود الهيستدين في وسط حمضي) ، ونسبة كبيرة (عمومًا > 50%) من المخلفات الكارهة للماء . [6] والهياكل الثانوية لهذه الجزيئات قد تكون على واحد من أربعة أشكال ألا وهي : (أ) البنية الحلزونية α Helix، أو (ب) البنية المسطحة β Stranded ٬ بسبب وجود 2 أو أكثر من روابط ثاني كبريتيد،  أو (ج) بنية العقدة أو دبوس الشعرβ Hairpin, Loop، بسبب وجود رابطة ثاني كبريتيد واحدة و / أو دورة سلسلة الببتيد أو (د) بنية امتدادية منبسطة [7].

معظم هذه الببتيدات ليس لها بنية منتظمة ضمن المحاليل، إلا أنها تلتف حول نفسها لتأخذ شكلا نهائيا يتوقف على توزعها ضمن الأغشية الحيوية. تحتوي الببتيدات على بقايا أحماض أمينية محبة للماء محاذية على جانب واحد وبقايا أحماض أمينية كارهة للماء محاذية على طول الجانب الآخر من الجزيء الحلزوني [5]. وتتميز هذه البتيدات بقدرتها على الانضمام إلى الاغشية الحيوية، وقد يكون ذلك بالنفوذ عبر الآغشية [8]، وتتنوع آليه هذه الببتيدات في فعاليتها ضد الجراثيم من إليه النفوذ عبر الأغشية إلى التأثير المباشر على أهداف ضمن السيتوبلاسما.

4-فعالية AMPs  ضد الجراثيم:

البتيدات المضادة للجراثيم لها عدة آليات عمل مختلفة تمامًا على الكائنات الحية الدقيقة عن المضادات الحيوية المستخدمة حاليًا لعلاج الالتهابات وهي ألية القتل المباشر حيث تعتبر هذه الببتيدات ذات تأثير مضاد وقاتل للبكتيريا وليس مثبطاً لنمو البكتيريا وذلك من خلال[3]:

• استهداف الغشاء الخلوي: حيث تتصف الببتيدات بقصرها وشحناتها الموجبة لذلك فهي تهاجم الاغشية الخلوية السالبة الشحنة وعمل ثقوب فيها مؤدية الى خروج المواد الخلوية ويتسم تاثيرها بالسرعة ، وكذلك تاثيرها بتراكيز منخفضة جدا.
• التداخل مع التفاعلات الايضية.
• استهداف المكونات داخل الخلايا من خلال توجيه فعاليتها ضد أهداف عنصرية محددة من السيتوبلاسما مثل DNA وRNA.

5-فعالية AMPs في تنظيم المناعة:

لا تستهدف الببتيدات مضادة الجراثيم البكتيريا وتدمرها بشكل مباشر فحسب، بل قد تمارس نشاطها المضاد للميكروبات حيث تعمل هذه الببتيدات على تعزيز قدرة الجسم على محاربة الميكروبات  وذلك من خلال:

• القدرة على تغيير التعبير الجيني المضيف، والعمل كمركبات كيميائية و/أو تحفيز إنتاج الكيموكين، وتثبيط عديد السكاريد الدهني الناجم عن الالتهابات.
• إنتاج السيتوكينات الالتهابية، وتعزيز التئام الجروح، وتعديل استجابات الخلايا الجذعية وخلايا الاستجابة المناعية التكيفية.
• كما انها تعد من مكونات المناعة الفطرية وتمثل “خط الدفاع الأول” كونها من أوائل الجزيئات التي تحارب الميكروبات الأجنبية حيث يتم إنتاجها بواسطة الخلايا المناعية مثل الخلايا البلعمية والنيتروفيل.
• تعرض بعض تفاعلات مناعية مختلفة مثل تنشيط وتمايز خلايا الدم البيضاء ؛ الحد من التعبير عن المركبات الكيميائية الالتهابية.
• تحفز الجهاز المناعي بطرق مختلفة في الثدييات من خلال (1). تنشيط الخلايا التائية؛ (2). تحفيز المستقبلات الشبيهة بالتول؛ (3). ارتفاع البلعمة. (4). تنشيط الخلايا الجذعية. (5). الجذب الكيميائي للنيتروفيل.
• تشير النماذج الحيوانية إلى أن الببتيدات الدفاعية المضيفة ضرورية للوقاية من العدوى وإزالتها. يبدو كما لو أن العديد من الببتيدات المعزولة في البداية على أنها “الببتيدات المضادة للميكروبات” قد ثبت أن لها وظائف بديلة أكثر أهمية في الجسم الحي (مثل الهيبسيدين) [9].

6- تطبيقات الببتيدات المضادة للميكروبات والاستفادة العلمية:

• صناعة المواد الغذائية

أحد التطبيقات الواعدة لـ AMPs هو إمكاناتها كأنظمة بديلة للعلاج بمضادات الميكروبات. وتشمل الاستخدامات غير الطبية الأخرى استخدامها في صناعة المواد الغذائية كمواد حافظة [10].

 تشمل هذه الأمثلة:

• النيسين، وهو AMP يتكون من 34 بقايا من الأحماض الأمينية، وهو معزول من المكورات اللبنية ويستخدم كمادة حافظة في الحليب الخالي من الدسم والحليب كامل الدسم، والجبن القريش ومنتجات الألبان الأخرى.
• انتيروسين، وهو معزول عن المكورات المعوية البرازية.
• الأوريوسين، وهو معزول عن المكورات العنقودية الذهبية.
• البوفيسين، المعزول من المكورات العقدية البقرية.
• ريوتيرين، وهو AMP معزول عن بكتيريا Lactobacillus reuteri؛ وغيرها التي تستخدم بشكل رئيسي كمواد حافظة في منتجات الألبان [11].
• اللاكتوفيرين هو مثال آخر على AMP، الذي يستخدم عادة كعامل مضاد للميكروبات في الولايات المتحدة الأمريكية للحفاظ على منتجات اللحوم. وفي الوقت نفسه، فإن مشتقه، اللاكتوفيريسين، هو AMP ذو نشاط مضاد للميكروبات أكثر قوة ومقاومة نسبية للحرارة، مما يوفر قدرة أعلى على حفظ الطعام [12].
• مثال آخر على AMP المستخدم كمادة حافظة للأغذية هو ناتاميسين، الذي يتم تطبيقه عادة على سطح الجبن والنقانق من نوع السلامي. يتم إنتاج ناتاميسين بواسطة Streptomyces spp. وله نشاط قوي مضاد للميكروبات ضد غالبية الفطريات التي تنتقل عن طريق الأغذية على الرغم من أنه ليس له نشاط ضد البكتيريا أو الفيروسات [13].
• تربية الحيوانات
• تعتبر AMPs أيضًا لها دور هام في تربية الحيوانات. نظرًا لقدرتها على إحداث تأثير قوي مضاد للميكروبات مع احتمالية منخفضة للمقاومة، فقد اعتُبر أنها تستطيع الحفاظ على الإنتاج الحيواني المستدام. على سبيل المثال، أدت المكملات الغذائية للدجاج التي تحتوي على النيسين إلى تغيير الميكروبيوم المعوي للدجاج، مما أدى إلى انخفاض عدد البكتيريا المعوية والباكتيرويديز [14].
• وأيضا يمكن للحيوانات المعدلة وراثيا، باستغلال تقنيات التلاعب الجيني تستطيع إنتاج AMPs التي يمكنها تحسين إنتاجها وتقليل احتمالية العدوى. على سبيل المثال، التعبير عن اللاكتوفيريسين البقري أو البشري في الغدد الثديية للماعز المعدلة وراثيا له مجموعة واسعة من الأنشطة المضادة للميكروبات [15].
• تم اقتراح المكملات الغذائية التي تحتوي على AMPs للحد من تفشي الأمراض الحيوانية وتحسين أداء النمو وصحة الحيوان في تربية الحيوانات كبديل للمكملات الغذائية بمضادات الميكروبات [16]. أدت إضافة AMPs مثل colistin E1، وcecropin AD إلى النظام الغذائي للخنازير المفطومة إلى تحسين النمو والحالة الصحية عن طريق تغيير ميكروبيوم الأمعاء بشكل مفيد [17].
• هناك استخدام حيوي آخر لـ AMPs في سياق تربية الحيوانات يتعلق بأنشطتها المضادة للفيروسات، مثل فيروس التهاب الشعب الهوائية المعدي (IBV)، والأنفلونزا[18]. ومن ثم، يمكن استخدام AMPs في الحيوانات لتقليل المخاطر المرتبطة بالعدوى الفيروسية، كما هو موضح في حالة عدوى أجنة الكتاكيت المعالجة بأمعاء الخنازير AMP، والتي لها نشاط قوي مضاد للفيروسات ضد IBV. [19]
• وقاية النبات
• تعد العدوى المسببة للأمراض أحد الأسباب الرئيسية لخسارة المحصول في حقل المحاصيل حيث يحدث فقدان غلة المحاصيل بشكل رئيسي بسبب مسببات الأمراض والآفات النباتية. ويمكن أن يصل إجمالي الخسارة إلى 40% من إنتاجية المحاصيل على المستوى العالمي وفقًا لدراسة حديثة، وهو ما يبدو أنه يتجاوز بكثير تعويض أي تقنيات تربية متقدمة ساهمت في زيادة الإنتاج بحوالي 1 -3% فقط سنوياً .
• ويشير هذا إلى أن الطريقة الأكثر فعالية لتعزيز إنتاجية المحاصيل هي منعها من الخسارة التي تسببها الآفات ومسببات الأمراض. ونظراً لتنوع مسببات الأمراض على مختلف المستويات، هناك حاجة ماسة إلى استراتيجيات الإدارة المتكاملة لحماية المحصول.
• وحثت الزيادة السريعة في مقاومة مضادات الميكروبات في مسببات الأمراض النباتية الباحثين على تطوير مبيدات حشرية جديدة واستراتيجيات إدارية لحماية النباتات. حيث وجد العديد من المزايا لـ AMPs، والتي تتضمن العلاقات الحادة بين الجرعة والاستجابة، والقدرة على القتل السريع، والتآزر الواسع، واختيار المقاومة البطيء.
• وفي تصميم استراتيجية وقاية النبات، لا يمكن لأي مكون أو طريقة واحدة إنجاز جميع المهام. حيث يمكن تسخير AMPs ذات المزايا الرئيسية كجزء مهم في الإستراتيجية المتكاملة .لذا فأن الطريقة المثلى والفعالة من حيث التكلفة التي تستفيد بشكل كامل من مزايا AMPs يمكن أن تشكل حلاً أفضل لإدارة مسببات الأمراض النباتية حيث أظهرت الببتيدات المضادة للميكروبات (AMPs) إمكانية القضاء على الفطريات والبكتيريا المسببة للأمراض النباتية.
• لذا وقاية النباتات هي تطبيق غير طبي آخر لـ AMPs.حيث يمكن أن تحل AMPs محل المبيدات الحشرية في مكافحة مسببات الأمراض النباتية والحشرات، مما قد يسمح بالحد من التلوث البيئي وتقليل مخاطر الأضرار على صحة الإنسان المرتبطة باستخدام المبيدات الحشرية [20].
• تعرض AMPs مثل iseganan أو pexiganan نشاطًا مهمًا ضد البكتيريا المسببة للأمراض النباتية مثل Pectobacterium spp.، في حين أن AMPs الأخرى لها أنشطة مضادة للفطريات مهمة يمكن استخدامها لحماية النباتات [21].
• إن التلاعب الوراثي للنباتات الذي يؤدي إلى التعبير المؤتلف عن AMPs في أجسامها يمكن أن يؤدي إلى مقاومة مسببات الأمراض النباتية. على سبيل المثال، تم إدخال الجين الذي يعبر عن Alf-AFP defensin في البطاطس، مما أدى إلى حماية أكبر ضد Verticillium dahliae. [22]
• علاوة على ذلك، أدى ظهور AMP cecropin P1 في الثدييات في التبغ المعدل وراثيًا إلى زيادة مقاومة النبات تجاه E. carotovora وPseudomonas هامشاتا وPseudomonas syringae وPseudomonas syringae. [23]
• وأخيرًا، عندما تم التعبير عن نظير للماجينين، MSI-99، في نباتات مختلفة، فقد وفر الحماية ضد العديد من مسببات الأمراض النباتية البكتيرية والفطرية [24]

لذا يجب الاهتمام  بكيفية التطبيق المحتمل لـ AMPs لوقاية النباتات مع المزايا المذكورة أعلاه، وتسليط الضوء على كيفية دمج AMPs في نظام إدارة متكامل أكثر كفاءة يعمل على زيادة إنتاجية المحاصيل وتقليل تطور مقاومة مسببات الأمراض.

• تربية الأحياء المائية
• وأخيرا، تم استخدام AMPs أيضًا في تربية الأحياء المائية. وبما أن الأسماك والمنتجات البحرية الأخرى تشكل مكونات أساسية في النظام الغذائي البشري، فإن تربية الأحياء المائية تمثل قطاعاً مالياً متنامياً. ومع ذلك، يمكن أن يرتبط تفشي الأمراض الميكروبية بتأخير كبير في الإنتاج وخسائر مالية فادحة [25].
• ولتحقيق هذه الغاية، يمكن لمركب AMP epinecidin-1 الاصطناعي أن يعيق نمو العديد من البكتيريا المعروفة بأنها ضارة بالكائنات المائية، مثل Pasteurella multocida، وE. coli، وAeromonas spp.، وVibrio spp.. [26]
• وفي حالة أخرى، كان للعديد من AMPs مثل caerin 1.1، أو NKLP27 ، نشاط قوي مضاد للميكروبات ضد معظم البكتيريا المسببة للأمراض البشرية والأسماك وفي الوقت نفسه، تمكنوا أيضًا من تعطيل العديد من فيروسات الأسماك التي تعتبر مهمة في تربية الأحياء المائية [27].

7- القدرة العلاجية

في الوقت الحاضر، التطبيق السريري لـ AMPs يركز بشكل رئيسي على علاج العدوى البكتيرية المسببة للأمراض، والتئام الجروح والالتهابات.

• حيث تعتبرهذه الببتيدات مرشحة لأن تكون من العوامل العلاجية الفعالة، وقابلة للتطوير ولأن تكون متممة لعمل المضاد الحيوية التقليدية، لانها تعمل بشكل مختلف عن المضادت الحيوية التقليدية، ولايبدو أنها تحرض مقاومة للمضادات الحيوية، لان لديها طيفاً واسعا ً من التأثير والفعالية (حيث أنها قادرة على إبادة الميكروب وليس تثبيط نموه) وذلك خلال فترة زمنية قصيرة جداً ويمكن ان تستعمل في القضاء على بعض البكتريا المقاومة للمضادات الحيوية.
• كما أنه هناك عدد من الببتيدات المتشكلة طبيعياً، ومشتقاتها أيضا، قد تم تطويرها بحيث تكون مضادات التهابية حديثة لها تأثيراً فاعلاً فيالاغشية المخاطية الفموية، والتهابات الرئة، والتي يرافقها التليف الكيسي والالتهابات الجلدية.
• ووجد أن AMPs تمتلك مجموعة متنوعة من الوظائف البيولوجية، مثل تنظيم المناعة وتولد الأوعية الدموية والتئام الجروح والنشاط المضاد للأورام.
• في حين أن عددًا قليلاً من AMPs قد دخل المرحلة السريرية لعلاج السرطان، فإن العيوب الحتمية في AMPs الطبيعية هي العوائق أمام تطوير AMPs ذات الفعالية العلاجية.
• تم استخدام الببتيدات المضادة للميكروبات كعوامل علاجية. يقتصر استخدامها عمومًا على الإعطاء عن طريق الوريد أو التطبيقات الموضعية نظرًا لنصف عمرها القصير. اعتبارًا من يناير 2018، كانت الببتيدات المضادة للميكروبات التالية قيد الاستخدام السريري [28]:

باسيتراسين: لعلاج الالتهاب الرئوي

بوسيبريفير: التهاب الكبد الوبائي سي

دالبافانسين: الالتهابات البكتيرية

الجوافانين 2: عدوى بكتيرية ضد إيجابية الجرام وسالبة الجرام أيضًا.

توجد العديد من المؤسسات لتحضير AMPs وبيعها، فضلا عن وجود قواعد بيانات خاصة بها وبرامج لتركيبها مثل التراكيب الثانوية خاصة المصمم منها وليس الطبيعي وفعاليتها في تحليل كريات الدم الحمر وتحديد معامل العلاج.وحالة التطبيق والآفاق في مختلف المجالات والمشكلات التي يتعين حلها.

References

1-Ageitos, J.M.; Sánchez-Pérez, A.; Calo-Mata, P.; Villa, T.G. (2017): Antimicrobial peptides (AMPs): Ancient compounds that represent novel weapons in the fight against bacteria”. Biochemical Pharmacology. 133 (6): 117–138.

2-Reddy, K.V.; Yedery, R.D.; Aranha, C. (2004): “Antimicrobial peptides: premises and promises”. International Journal of Antimicrobial Agents. 24 (6): 536–547.

3-Zhang, Q. Y.; Yan, Z. B.; Meng, Y. M.; Hong, X. Y.; Shao, G.; Ma, J. J.; Cheng, X. R.; Liu, J.; Kang, J.; Fu, C. Y. (2021): Antimicrobial peptides: Mechanism of action, activity and clinical potential. Mil. Med. Res., 8 (1): 48.

4- Mattick AT, Hirsch A. (1947): Further observations on an inhibitory substance (nisin) from lactic streptococci. Lancet. 1947;2(6462):5–8.

5-Yeaman, M.R.; Yount, N.Y. (2003): “Mechanisms of antimicrobial peptide action and resistance”. Pharmacological Reviews. 55 (1): 27–55.

6-Papagianni, M. (2003): “Ribosomally synthesized peptides with antimicrobial properties: biosynthesis, structure, function, and applications”. Biotechnology Advances. 21 (6): 465–499.

 7- Dhople, V.; Krukemeyer, A,; Ramamoorthy, A. (2006): “The human beta-defensin-3, an antibacterial peptide with multiple biological functions”. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) – Biomembranes. 1758 (9): 1499–1512.

8-Hancock, R.E,;Rozek, A. (2002):“Role of membranes in the activities of antimicrobial cationic peptides”. FEMS Microbiology Letters. 206 (2): 143–149.

9- Hunter, H.N.; Fulton, D.B.; Ganz, T.; Vogel, H.J. (2002): “The solution structure of human hepcidin, a peptide hormone with antimicrobial activity that is involved in iron uptake and hereditary hemochromatosis”. The Journal of Biological Chemistry. 277 (40): 37597–37603.

10-  Mills, S.; Serrano, L.M.; Griffin, C.; O’Connor, P.M.; Schaad, G.; Bruining, C.; Hill, C.; Ross, R.P.; Meijer, W.C.(2011); Inhibitory Activity of Lactobacillus Plantarum LMG P-26358 against Listeria Innocua When Used as an Adjunct Starter in the Manufacture of Cheese. Microb. Cell Fact.  10 (Suppl. S1), S7.

11- Silva, C.C.G.; Silva, S.P.M.; Ribeiro, S.C. (2018): Application of Bacteriocins and Protective Cultures in Dairy Food Preservation. Front. Microbiol.  9: 594.

12-Galanakis, C. (2019): Food Quality and Shelf Life; Elsevier: Amsterdam, The Netherlands, ISBN 978-0-12-817190-5.

13-Elsser-Gravesen, D.; Elsser-Gravesen, A. (2014): Biopreservatives. Adv. Biochem. Eng. Biotechnol.  143: 29–49.

14-Józefiak, D.; Kierończyk, B.; Juśkiewicz, J.; Zduńczyk, Z.; Rawski, M.; Długosz, J.; Sip, A.; Højberg, O. (2013): Dietary Nisin Modulates the Gastrointestinal Microbial Ecology and Enhances Growth Performance of the Broiler Chickens. PLoS ONE , 8, e85347.

15- Zhang, J.X.; Zhang, S.F.; Wang, T.D.; Guo, X.J.; Hu, R.L. (2007): Mammary Gland Expression of Antibacterial Peptide Genes to Inhibit Bacterial Pathogens Causing Mastitis. J. Dairy Sci.  90: 5218–5225.

16–  Hao, H.; Cheng, G.; Iqbal, Z.; Ai, X.; Hussain, H.I.; Huang, L.; Dai, M.; Wang, Y.; Liu, Z.; Yuan, Z. (2014): Benefits and Risks of Antimicrobial Use in Food-Producing Animals. Front. Microbiol.  5: 288.

17-Cutler, S.A.; Lonergan, S.M.; Cornick, N.; Johnson, A.K.; Stahl, C.H. (2007):Dietary Inclusion of Colicin E1 Is Effective in Preventing Postweaning Diarrhea Caused by F18-Positive Escherichia Coli in Pigs. Antimicrob. Agents Chemother.  51: 3830–3835.

18- Guo, N.; Zhang, B.; Hu, H.; Ye, S.; Chen, F.; Li, Z.; Chen, P.; Wang, C.; He, Q. (2018):Caerin1.1 Suppresses the Growth of Porcine Epidemic Diarrhea Virus In Vitro via Direct Binding to the Virus. Viruses, 10: 507.

 19- Sun, Q.; Wang, K.; She, R.; Ma, W.; Peng, F.; Jin, H. (2010): Swine Intestine Antimicrobial Peptides Inhibit Infectious Bronchitis Virus Infectivity in Chick Embryos. Poult. Sci. , 89: 464–469.

20-Rekha; Naik, S.N.; Prasad, R. (2006): Pesticide Residue in Organic and Conventional Food-Risk Analysis. J. Chem. Health Saf., 13:12–19.

21-Kamysz, W.; Krolicka, A.; Bogucka, K.; Ossowski, T.; Lukasiak, J.; Lojkowska, E. (2005): Antibacterial Activity of Synthetic Peptides Against Plant Pathogenic Pectobacterium Species. J. Phytopathol., 153: 313–317.

22-Gao, A.G.; Hakimi, S.M.; Mittanck, C.A.; Wu, Y.; Woerner, B.M.; Stark, D.M.; Shah, D.M.; Liang, J.; Rommens, C.M. (2000): Fungal Pathogen Protection in Potato by Expression of a Plant Defensin Peptide. Nat. Biotechnol., 18: 1307–1310.

23- Zakharchenko, N.S.; Rukavtsova, E.B.; Gudkov, A.T. (2005): Bur’ianov, I.I. [Enhanced resistance to phytopathogenic bacteria in transgenic tobacco plants with synthetic gene of antimicrobial peptide cecropin P1]. Genetika, 41: 1445–1452.

24-Alan, A.R.; Blowers, A.; Earle, E.D. (2004): Expression of a Magainin-Type Antimicrobial Peptide Gene (MSI-99) in Tomato Enhances Resistance to Bacterial Speck Disease. Plant Cell Rep., 22: 388–396.

25-Erdem Büyükkiraz, M.; Kesmen, Z. (2022): Antimicrobial Peptides (AMPs): A Promising Class of Antimicrobial Compounds. J. Appl. Microbiol.  132:1573–1596.

26- Yin, Z.-X.; He, W.; Chen, W.-J.; Yan, J.-H.; Yang, J.-N.; Chan, S.-M.; He, J.-G. (2006): Cloning, Expression and Antimicrobial Activity of an Antimicrobial Peptide, Epinecidin-1, from the Orange-Spotted Grouper, Epinephelus Coioides. Aquaculture , 253: 204–211.

27-León, R.; Ruiz, M.; Valero, Y.; Cárdenas, C.; Guzman, F.; Vila, M.; Cuesta, A. (2020): Exploring Small Cationic Peptides of Different Origin as Potential Antimicrobial Agents in Aquaculture. Fish Shellfish Immunol., 98: 720–727.

28- Gomes, B.; Augusto, M.T.; Felício, M.R.; Hollmann, A.; Franco, O.L.; Gonçalves, S.; Santos, N.C. (2018): “Designing improved active peptides for therapeutic approaches against infectious diseases”. Biotechnology Advances. 36 (2): 415–429.